维罗细胞（2.5 × 105细胞/孔）， BHK21细胞（1.2 × 105细胞/孔）或原代猕猴肌腱成纤维细胞（传代 11、2 × 105细胞/孔），分别接种在96个孔板中，并在37°C下以0.005（Vero细胞）和0.002（BHK21和肌腱成纤维细胞）的MOI暴露于MAYV1小时。 然后将细胞彻底洗涤两次，随后加入100μL补充有药物的培养基，浓度在300至2.5μg/ mL和200至5μg/mL（每次稀释8孔）之间，分别用于法匹拉韦和利巴韦林。选定的MOI在48小时内持续感染并杀死所有细胞。16个未添加病毒的孔作为阴性对照。
将细胞培养物在37°C，5%CO2并使用结晶紫染色监测细胞活力，直到感染后72小时（HPI）。病毒抑制和50%抑制浓度（IC50%）使用Prism软件版本8.1（GraphPad软件，拉霍亚，加利福尼亚州，美国）计算。
在测定IC50%之前，在暴露后72小时使用结晶紫染色在各种细胞类型中测定MAYV原液滴度。使用Käber方法观察到的滴度为6.8×106;6.2 × 106;3.2 × 106TCID 50%/mL 分别用于 Vero-E6、BHK-21 和原代肌腱成纤维细胞。
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