达克替尼(dacomitinib)可增强常规化疗药物的疗效

　　MTT测定用于评估细胞毒性和多药耐药性(MDR)逆转作用。通过流式细胞术测量药物流出和细胞内药物积累。建立H460/MX20细胞异种移植模型，评价达克替尼(dacomitinib)在体内增强拓扑替康抗癌效果。为了确定达克替尼与 ABCG2 底物结合位点的相互作用，达克替尼与 [125进行了 I]-碘芳基叠氮基哌唑嗪 (IAAP)。在一系列不同浓度的达克替尼存在下测量 ABCG2 的钒酸盐敏感性 ATP 酶活性，以评估达克替尼对作为转运蛋白能量来源的 ATP 水解的影响。基于流式细胞术的测定和蛋白质印迹被用来研究达克米宁是否能抑制ABCG2的表达水平。通过实时定量RT-PCR分析ABCG2的mRNA表达水平。Western blotting检测AKT、ERK蛋白表达水平及其磷酸化水平。

　　结果

　　在这里，我们发现达克替尼是一种不可逆的泛 ErbB 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)，在 III 期临床试验中，可以提高常规化疗药物的疗效，特别是在 ABCG2 过度表达的 MDR 癌细胞中，但在亲本敏感细胞中没有。发现达克替尼通过抑制转运蛋白外排功能显着增加 ABCG2 探针底物 [阿霉素 (DOX)、罗丹明 123 (Rho 123) 和 Hoechst 33342] 的积累。此外，达克替尼刺激 ABCG2 ATPase 活性并与 [125I]-IAAP 以浓度依赖性方式对 ABCG2 进行光标记。然而，达克替尼并未改变蛋白质和 mRNA 水平的 ABCG2 表达或抑制 AKT 和 ERK 的 ErbB 下游信号传导。重要的是，达克替尼显着增强了拓扑替康在裸鼠 ABCG2 过表达 H460/MX20 细胞异种移植物中的功效，而不会产生额外的毒性。

　　结论

　　这些结果表明达克替尼(dacomitinib)通过抑制 ABCG2 外排功能和增加抗癌药物的细胞内积累来逆转 ABCG2 介导的 MDR。我们的研究结果提倡对 ABCG2 过表达 MDR 肿瘤的癌症患者进行达克替尼联合常规化疗的进一步临床研究。

　　抑制 ABC 转运蛋白的药物转运功能是逆转癌症治疗耐药性的一种有前景的策略。迄今为止，已经致力于开发 ABC 转运蛋白抑制剂的巨大努力。然而，由于副作用或意外的药代动力学相互作用，这些 ABC 转运蛋白抑制剂在临床实践中的应用受到限制。多年来，我们一直在研究使用分子靶向 TKI 来抑制 ABC 转运蛋白以规避 MDR。我们发现 TKI 可以在低浓度下抑制 ABC 转运蛋白的药物外排活性，并增强化疗药物在癌细胞中的抗癌作用。因此，我们推测 TKI 可能被重新定位为 ABC 转运蛋白的抑制剂，以规避临床中的 MDR。

　　达克替尼(dacomitinib)是一种很有前途的第二代 EGFR TKI，在体外表现出强大的抗癌活性。更重要的是，III 期临床试验的结果还表明，与第一代 EGFR TKI 厄洛替尼相比，达克替尼可以显着改善疾病 PFS。此外，在大多数临床和分子亚组中观察到 PFS 获益，特别是 KRAS 野生型/EGFR 任何状态、KRAS 野生型/EGFR 野生型和 EGFR 突变体。在这项研究中，我们在体外和体内研究了达克替尼对 ABCG2 介导的 MDR 的规避。

　　达克替尼(dacomitinib)首先在具有 ABCG2 过表达的癌细胞模型中评估 MDR 逆转。虽然浓度低于 1 μM 的达克替尼对细胞增殖没有明显影响，但发现它在两种药物选择的 ABCG2 过表达癌细胞系（H460/MX20 和 S1-MI-80）中显着增强了其他 ABCG2 底物抗癌药物的抗癌活性）和两个 ABCG2 稳定转染的 HEK293 细胞（表达野生型 ABCG-482-R2 或突变型 ABCG-482-T7）。MDR 逆转是特异性的，因为在亲代癌细胞（H460 和 S1）或骨架载体转染的 HEK293/pcDNA3.1 细胞中没有观察到明显的影响。此外，达克替尼没有显着改变非 ABCG2 底物对癌细胞的抗癌活性。体外有希望的数据也在H460/MX20 细胞异种移植裸鼠模型中得到了体内验证。还发现达克替尼(dacomitinib)可显着增强 ABCG2 底物药物拓扑替康在 H460/MX20 细胞异种移植物中的抗肿瘤活性，而不会增加毒性。体外和体内数据表明达克替尼可能是 ABCG2 抑制剂的一个很好的候选者，这提倡在 ABCG2 过表达的癌症患者中进一步研究达克替尼与常规抗癌药物的联合化疗。ABCG2 介导的 MDR 的逆转可能涉及抑制外排功能或减少转运蛋白的表达。为了解释这一点，通过流式细胞术在过表达 ABCG2 的癌细胞中测量了药物积累和外排活性。数据表明，达克替尼抑制 ABCG2 底物流出细胞，从而导致细胞内 ABCG2 底物如 Rho123、DOX 和 Hoechst 33342 的积累增加。 由于 ABCG2 的药物流出取决于 ATPase 对 ATP 水解产生的能量，我们检测了存在或不存在达克替尼时 ABCG2 ATPase 的活性。达克替尼以浓度依赖性方式刺激 ATPase 活性，表明达克替尼可能是 ABCG2 的底物。这与达克替尼(dacomitinib)在 [ABCG2 的125I]-IAAP 光亲和标记。Dacomitinib 可能与 ABCG2 的 ATP 结合位点结合。

　　达克替尼(dacomitinib)可作为一种新型化学增敏剂来克服 ABCG2 过度表达的癌细胞中的 MDR。需要进一步的临床研究来充分了解达克替尼和其他常规抗癌药物在癌症患者中的有益组合。微信扫描下方二维码了解更多：